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今天小编或将为你解开PCR反应体系中,荧光染料法

浏览次数:78发布日期:2020-05-28

       PCR的时候,你是否还在费心的准备冰盒,是否还在担忧会否因为室温太高导致酶活降低甚至失效,今天小编或将为你解开这些烦忧。

       在传统PCR反应体系中,加入过量荧光染料,该染料只与双链DNA小沟结合的染料,并不与单链DNA链结合,而且在游离状态不发出荧光,只有掺入DNA双链中才可以发光,因此,在PCR体系中,随着特异性PCR产物的指数扩增,每个循环的延伸阶段,染料掺入双链DNA中,其荧光信号强度与PCR产物的数量呈正相关。下图以SYBR Green I染料为例:

    

反转录PCR(Reverse TranscriptionPCR, RT-PCR)

RT-PCR是一种将cDNA合成与PCR技术结合分析基因表达的快速灵敏的方法,主要用于对表达信息进行检测或定量分析。在实际应用中,RT—PCR又常常分为一步法RT-PCR和两步法RT-PCR。

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