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PCR试剂盒六大使用事项请知悉!

浏览次数:35发布日期:2020-08-03
   PCR试剂盒在使用中我们应注意些什么呢?以下几点给您答案:
  1.保存
  未拆封的试剂盒,请于-20℃保存;拆封之后,应在4℃保存。在试剂消耗量较少的实验室,可以考虑将试剂盒的按照组分单独分装,后保存在-20℃。
  2.配置
  PCR试剂盒内所含各组份都是混合物,在静置情况下会发生分层现象,因此试剂盒现配现用,震荡混匀,避免反复冻融,避免预混。其中,反复冻融将大幅缩短试剂盒使用寿命。
  在扩增体系的选择时,尽量选择标准体系,再根据检材情况加入模板,之后切勿忘记以PCR用水补足扩增体系。
  3.切勿预混
  因试剂盒中酶的活性较高,将各组份按照比例混合之后,即使没有达到它的最适温度,但也可能发生与引物结合,导致实验结果出现丢位点或者杂合子纯化等情况。
  4.阴阳性参照
  实验结果会受提取、扩增和电泳等多个环节的影响,因此,每次扩增实验都应该添加一组阴阳性参照。这样,当结果异常的时,我们就可以结合阴阳性参照的表现,排查问题出在哪个环节。
  5.阳性参照是否通用
  虽然多数试剂盒的阳性参照都是007,但是案件试剂盒和建库试剂盒的阳性参照浓度不同,通常来说案件试剂盒的浓度更低,扩增时需选用试剂盒相对应的阳性参照。
  6.扩增程序
  扩增程序能够将试剂盒大效能发挥出来而设计,切勿随意更改;再者,不同试剂盒所含酶的升温模式也有不同,因此,在设置扩增程序时,要选择对应的升温模式。
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