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PCR扩增试剂盒实验时的几大事项说明

浏览次数:27发布日期:2020-10-21
   PCR扩增试剂盒提供DNA扩增所需要的基本试剂。DNA扩增时,用户需要自行准备模板和扩增所需要的引物。高温嗜热Pfu DNA聚合酶主要用于对保真度要求非常高的DNA扩增,这些扩增要求扩增的产物中不能出现突变等错误。
  PCR扩增试剂盒实验事项:
  1.样本上PCR平台可做的样本包括血液,唾液,口腔拭子,在实验中,对于DNA投入量要求不是很高,根据不同项目需求,DNA投入量的范围在100pg到100ng之间。
  2.进行PCR反应前,可以将所有gDNA的浓度稀释到同一浓度,并转移到PCR8联管中,一方面是便于排枪操作,另一方面是加入相同起始量的gDNA,这样可以降低最终文库的浓度差异,便于混合文库。
  3.大多数情况下引物是1管,操作相当方便;当目标区域是外显子或者是其他连续区域时,把引物分装为2管,需要第二轮PCR前把产物合并,再进行下一步反应。
  4.执行多重PCR反应时,特别是样本量多的情况下,可以将T1设为一组,T2设为一组,便于制备反应试剂混合液和排枪操作;并把解冻好的试剂放置在冰盒上,在冰盒上进行加样操作。
  5.实验中,可以在PCR管壁上和管盖上同时进行反应编号标记,防止高温或其他原因导致记号消失,避免后续产物混合操作失误,造成样本交叉污染。
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