实时荧光PCR试剂盒使用注意事项

　　实时荧光PCR试剂盒该染料与双链DNA结合后，能够产生强度高于SYBR Greenl的荧光。结合了以下诸多优势：热启动酶、优化的缓冲液、*荧光染料，可有效地提高mRNA表达水平检测的可靠性、重复性和灵敏度。qPCRmix为即用型的2x预混母液，该混合母液经过处理，稳定性高，主要包含：双链DNA结合染料、热启动酶、MgCl2、dNTPs、反应缓冲液，可确保产生实时定量PCR结果。

　　实时荧光PCR试剂盒使用注意事项：

　　1.保存

　　未拆封的试剂盒，请于-20℃保存；拆封之后，应在4℃保存。在试剂消耗量较少的实验室，可以考虑将试剂盒的按照组分单独分装，后保存在-20℃。

　　2.配置

　　试剂盒内所含各组份都是混合物，在静置情况下会发生分层现象，因此，试剂盒现配现用，震荡混匀，避免反复冻融，避免预混。其中，反复冻融将大幅缩短试剂盒使用寿命。在扩增体系的选择时，尽量选择标准体系，再根据检材情况加入模板，之后切勿忘记以PCR用水补足扩增体系。

　　3.切勿预混因试剂盒中酶的活性较高，将各组份按照比例混合之后，即使没有达到它的合适温度，但也可能发生与引物结合，导致实验结果出现丢位点或者杂合子纯化等情况。

　　4.阴阳性参照

　　实验结果会受提取、扩增和电泳等多个环节的影响，因此，每次扩增实验都应该添加一组阴阳性参照。这样，当结果异常的时，我们就可以结合阴阳性参照的表现，排查问题出在哪个环节。

　　实时荧光PCR试剂盒特点：

　　1.高灵敏度：可定量检测低拷贝靶基因。

　　2.稳定性增强。

　　3.灵敏度更高，Ct值更小，对PCR反应具有更小的抑制作用。

　　4.热启动酶性能强劲、可靠。