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小鼠糖原合成酶激酶(GSK)ELISA试剂盒标本的采集与保存

浏览次数:40发布日期:2022-01-11

小鼠糖原合成酶激酶(GSK)ELISA试剂盒标本的采集与保存:


1.         血清:


将收集于血清分离管的全血标本在室温放置 2 小时或 4oC 过夜,然后 1000×g 离心 20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20oC 或-80oC 保存,但应避免反复冻融。


2.         血浆:


用 EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的 30 分钟内于 2-8oC 1000×g 离心 15 分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20oC或-80oC 保存,但应避免反复冻融。


3. 组织匀浆:


1) 取适量组织块,于预冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液,称重后备用(组织块较大需先剪碎后再匀浆);


2) 可同时选用多种匀浆方法达到较好的破碎效果:首先将组织块移入玻璃匀浆器,加入5-10mL 预冷PBS 进行充分研磨,该过程需在冰上进行(有条件实验室可选用机器匀浆);得到的匀浆液可再利用超声破碎或反复冻融 进一步处理(超声破碎过程中注意冰浴降温;反复冻融法可重复2次)。


3) 将制备好的匀浆液于5000×g 离心5 分钟,留取上清即可检测。


4. 细胞裂解液:


1)贴壁细胞需要先用胰酶消化,离心收集细胞(悬浮细胞可直接离心收集);


2)将收集到的细胞用冷PBS 洗3 次;


3)物理方法裂解细胞(可先超声破碎细胞,再反复冻融):


i 超声破碎:取适量PBS 重悬细胞,用一定功率的超声波处理细胞悬液,使细胞急剧震荡破裂。


ii 反复冻融:将待破碎的细胞在-20 oC 以下冰冻,室温融解,反复3 次,使细胞溶胀破碎。


4)将标本于2-8 oC 1500×g 离心10 分钟,收集上清备用。


5. 细胞培养上清或其它生物标本:


请 1000×g 离心 20 分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20oC 或-80oC 保存,但应避免反复冻融。


注意:


1.         以上标本均需密封保存,4oC保存应小于1周,-20oC不应超过1个月,-80oC不应超过2个月。


2.         标本使用前应缓慢均衡至室温,不应加热使之融解。


3.         实验前红细胞裂解液必须用标准品稀释液稀释。

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