荧光探针pcr试剂盒的相关知识点介绍
浏览次数:1014发布日期:2022-07-25
荧光探针pcr试剂盒的原理在于PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;刚开始时,探针结合在DNA任意一条单链上;PCR扩增时,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成*同步。
常用于荧光免疫法中标记抗原或抗体,亦可用于微环境,如表面活性剂胶束、双分子膜、蛋白质活性位点等处微观特性的探测。通常要求探针的摩尔吸光系数大,荧光量子产率高;荧光发射波长处于长波且有较大的斯托克斯位移;用于免疫分析时,与抗原或抗体的结合不应影响它们的活性。
目前,荧光探针pcr试剂盒的方法主要有单点测定和电荷耦合装置(CCD)荧光成像(包括用于微区分析的激光共聚焦荧光显微镜成像)。由于光电倍增管点扫描时间较长,激光照射强度高,很难抓住荧光早期变化。而CCD荧光成像的面阵大,成像视野广,成像时间可以调节,因而检测效果比较好。
化学发光检测的特点是设备简单、操作简便、分析速度快及灵敏度高。化学发光成像分析(CLI)是将化学发光与成像技术相结合,从而具有分辨率高、多样品同时检测、光谱响应范围宽以及灵敏度高等特点。已广泛应用于凝胶、蛋白印记及微阵列芯片中的化学发光信号检测。