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有关RT-PCR试剂盒的那些事,一起来了解下吧

浏览次数:616发布日期:2022-11-24
  RT-PCR试剂盒的组成核酸提取试剂核酸扩增或逆转录-核酸扩增试剂产物检测试剂(有些使用全自动分析仪的PCR方法因其核酸扩增和检测同时完成,故无专门的产物检测试剂)影响PCR试剂盒质量的因素内在因素:原材料、核酸提取方法、方法学设计影响PCR试剂盒质量的因素:扩增所需的原材料寡核苷酸引物和探针缓冲液和dNTP聚合酶、逆转录酶等PCR反应混合物。
 
  RT-PCR试剂盒除了考虑它的敏感性、特异性、稳定性、操作简便程度外,还应包括:试剂盒提供的试剂覆盖整个PCR检测试验的程度。如果试剂盒提供了整个PCR检测试验的试剂,表明该试剂盒对PCR检测试验的试剂具有了全程控制性能。相反,PCR检测的试剂的质量控制程度比较低,意味着检测质量可控程度低。
 
  例如:溴化乙锭仅仅起荧光染料的作用,如果在阳光下长时间的照射下失效了,在紫外灯下发荧光效能降低,可能会造成一些弱阳性样品的漏检,出现假阴性。其它试剂出现问题也是一样影响检测质量。试剂盒在生产过程中,有一套试剂生产质量控制体系。每一试剂组分都经过灵敏度、敏感性、特异性质量控制的检测,在有效期内能确保每种试剂的质量。因此,选择试剂盒进行PCR检测是比较理想的控制方法。在PCR检测中,建议全部使用试剂盒提供试剂,对PCR检测质量控制有益。
 
  实验耗材也是影响PCR检测质量的因素之一。PCR反应管薄厚以及传导热量性能等直接影响PCR检测效果。在热盖PCR仪上一般不需要加入矿物油,但有些PCR反应管盖子不严密,导致扩增过程中反应液水份蒸发,严重影响检测灵敏度。
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