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人apelin 12(AP12)ELISA Ki实验方法操作步骤

浏览次数:147发布日期:2024-05-17

人apelin 12(AP12)ELISA Ki实验方法操作步骤:

1.编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)

2.加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50µl。然后在待测样品孔先 加样品稀释液 40µl,然后再加待测样品 10µl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,

3.温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此 重复 5 次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶标试剂 50µl,空白孔除外。

7.温育:操作同 3。

8.洗涤:操作同 5。

9.显色:每孔先加入显色剂 A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

15 分钟.

10.终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。


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