RT-PCR试剂盒是一种用于检测RNA的高效工具

　　RT-PCR试剂盒是一种用于检测RNA的高效工具，其核心原理是将RNA反转录为cDNA，再通过PCR技术扩增目标序列。具体工作流程如下：
 

　　1.RNA提取：从样本中提取高质量RNA，常用方法包括TRIol法或磁珠法，确保RNA完整性和纯度。
 

　　2.逆转录(Reverse Transcription, RT)：利用逆转录酶(如MMLV逆转录酶)将RNA转化为互补DNA(cDNA)。此过程需依赖特异性引物(如Oligo(dT)18引物或随机引物)，在低温条件下启动反转录反应，生成单链cDNA。
 

　　3.PCR扩增：将cDNA作为模板，通过设计特异性引物靶向目标序列，在DNA聚合酶作用下进行指数级扩增。试剂盒通常提供预优化的反应缓冲液(含dNTP、Mg等成分)，确保扩增效率。部分试剂盒采用两管式操作，将RT与PCR分步进行，便于单独优化反应条件。
 

　　RT-PCR试剂盒的储存需严格遵循试剂特性、组分分类和厂家说明书要求，核心原则是低温、避光、防潮、避免反复冻融，通常包含多种功能组分，不同组分的稳定性差异较大，需分开储存：
 

　　酶类组分
 

　　核心成分：反转录酶、TaqDNA聚合酶、酶缓冲液等。
 

　　储存条件：-20℃±5℃低温冷冻储存，部分高活性酶需-80℃长期保存。
 

　　注意事项：避免与水、易挥发试剂同放；严禁反复冻融(反复冻融会导致酶活性下降)，建议分装成单次使用量后储存。
 

　　核酸类组分
 

　　核心成分：引物、探针、阳性对照、阴性对照、RNA酶抑制剂等。
 

　　储存条件：未开封时-20℃储存；开封后若短期使用(1周内)可4℃冷藏，长期使用仍需-20℃分装冻存。
 

　　注意事项：RNA类对照易降解，需全程避光、防RNA酶污染(如使用无酶枪头、离心管)。
 

　　*其他辅助组分
 

　　核心成分：PCR 反应液、染料、稀释液、裂解液等。
 

　　储存条件：多数可 4℃ 冷藏保存，部分含易分解成分的裂解液需 -20℃ 冻存。
 

　　注意事项：避免阳光直射；含醇类的裂解液需密封储存，防止挥发。