犬硫酸类肝素elisa试剂盒样本如何进行处理检测
浏览次数：496发布日期：2021-05-10
肝素elisa试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被犬硫酸类肝素（HS）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成黄色。颜色的深浅和样品中的犬硫酸类肝素（HS）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
肝素elisa试剂盒样本处理及要求：
1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8C1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3.组织匀浆：用预冷的PBS（0.01M，pH=7.4）冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1：9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。
推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。再将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4.细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃
或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
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