大鼠elisa试剂盒操作步骤详解

　　大鼠elisa试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中大鼠TNF-α的浓度。大鼠TNF-α捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的大鼠TNF-α会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗大鼠TNF-α抗体后，抗大鼠TNF-α抗体与大鼠TNF-α接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。

　　生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。加入显色剂，若样本中存在TNF-α将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，大鼠TNF-α浓度与0Dm值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中0D值，即可算出标本中TNF-α浓度。

　　大鼠elisa试剂盒操作步骤：

　　1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数，取出所需板条放置在框架内，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃。

　　2.建议设置本底较正孔，即空白孔，设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。

　　3.分别将标本或不同浓度标准品（100u1/孔）加入相应孔中，用封板胶纸封住反应孔，室温孵育120分钟。对于血清或血浆标本，请加入50u1样本分析缓冲液后加50u1标本，如稀释量大，请将样本与样本分析缓冲液等量加入，不足部分用标准品稀释液补充至100ul。

　　4.洗板5次，且置厚吸水纸上拍干。

　　5.加入生物素化抗体工作液（100u1/孔）。用封板胶纸封住反应孔，室温孵育60分钟。

　　6.洗板5次，且置厚吸水纸上拍干。

　　7.加入酶结合物工作液（100u1/孔）。用封板胶纸封住反应孔，避光室温孵育20分钟。

　　8.洗板5次，且置厚吸水纸上拍干。

　　9.加入显色剂TMB100u1/孔，避光室温孵育20分钟。

　　10.加入终止液50u1/孔，混匀后即刻测量0D450值。