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大鼠elisa试剂盒操作步骤详解

浏览次数:123发布日期:2022-01-19
  大鼠elisa试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中大鼠TNF-α的浓度。大鼠TNF-α捕获抗体已预包被于酶标板上,当加入标本或参考品时,其中的大鼠TNF-α会与捕获抗体结合,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗大鼠TNF-α抗体后,抗大鼠TNF-α抗体与大鼠TNF-α接合,形成夹心的免疫复合物,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。
  生物素与亲合素特异性结合,亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来;其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。加入显色剂,若样本中存在TNF-α将会形成免疫复合物,辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质,在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测,读其450nm处的OD值,大鼠TNF-α浓度与0Dm值之间呈正比,通过参考品绘制标准曲线,对照未知样本中0D值,即可算出标本中TNF-α浓度。
  大鼠elisa试剂盒操作步骤:
  1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数,取出所需板条放置在框架内,暂时用不到板条请放回铝箔袋密封,保存于4℃。
  2.建议设置本底较正孔,即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。
  3.分别将标本或不同浓度标准品(100u1/孔)加入相应孔中,用封板胶纸封住反应孔,室温孵育120分钟。对于血清或血浆标本,请加入50u1样本分析缓冲液后加50u1标本,如稀释量大,请将样本与样本分析缓冲液等量加入,不足部分用标准品稀释液补充至100ul。
  4.洗板5次,且置厚吸水纸上拍干。
  5.加入生物素化抗体工作液(100u1/孔)。用封板胶纸封住反应孔,室温孵育60分钟。
  6.洗板5次,且置厚吸水纸上拍干。
  7.加入酶结合物工作液(100u1/孔)。用封板胶纸封住反应孔,避光室温孵育20分钟。
  8.洗板5次,且置厚吸水纸上拍干。
  9.加入显色剂TMB100u1/孔,避光室温孵育20分钟。
  10.加入终止液50u1/孔,混匀后即刻测量0D450值。
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