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浅析核酸检测PCR试剂盒的作用与意义所在

浏览次数:39发布日期:2022-08-15
  核酸检测PCR试剂盒和紫外凝胶成像系统(紫外分析仪或手提紫外等)以及移液器都可能影响PCR检测的质量。PCR仪是控制PCR反应温度变化的,其温度和控制时间的准确程度可能会影性PCR检测质量。移液器取液的准确程度影响反应体系是否能达到反应环境。紫外分析系统对检测敏感性有明显的影响。紫外分析系统有3种类型仪器:紫外分析仪、紫外凝胶成像系统、手提紫外灯。紫外分析仪直接用眼睛观察琼脂糖凝胶上DNA扩增带。
 
  紫外凝胶成像系统是在计算机上通过摄像系统对琼脂糖凝胶上DNA扩增带进行观察。手提紫外灯可以在电泳过程中直接对琼脂糖凝胶上DNA扩增带进行观察,使用方便,分辨率比较低。依据这些仪器的分辨率由高到低顺序是紫外分析仪、紫外凝胶成像系统、手提紫外灯。紫外分析仪有时能看到弱阳性扩增带,在紫外凝胶成像系统上却看不到。手提紫外灯只有在阳性扩增带比较亮时才能看到,建议为保证检测质量建议不用手提紫外灯,可用于临时的电泳结果观察。
 
  核酸检测PCR试剂盒适用于以RNA为模板合成cDNA的反转录,以及后续的PCR扩增实验。选用优异的M-MLVRT酶,可以合成大于5kb的cDNA;反转录过程中的特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷,可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物实验。
 
  测定RNA浓度按以下步骤进行操作:
 
  (1)取1u1RNA原液,放在0.5mlEP管中,加入249u1ddH20,用移液枪反复混匀。
 
  (2)用ddH20为空白对照,调节A260零点。
 
  (3)倒掉比色杯中的水,加入稀释并混合均匀的RNA样液,测定A260值。倒掉比色杯中的RNA样液,用ddH20冲洗比色杯,再调节A280零点。
 
  (4)倒掉比色杯中的水,加入稀释并混合均匀的RNA样液,测定A280值。计算A260/A280比值,比值≥1.8,满足实验要求。
 
  (5)RNA原液浓度=A260×稀释倍数×40(ng/u1)。
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