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关于PCR扩增试剂盒您了解多少?

浏览次数:32发布日期:2022-09-13
  PCR扩增试剂盒在血样DNA中的检验及对比结果。方法抽取320例血样DNA作为检测对象,并应用不同PCR扩增试剂盒进行检测,在此基础上,结合所得的血样检验结果进行分析比较。结果经研究,在样本相同的情况下,血样检验差异率为1.25%(4/320)。而且经检测,4例出现不同检验分型的样本均存在等位基因缺失。另外,Profiler PlusTM扩增不平衡发生率为0.9375%,IdentifilerTM扩增不平衡发生率为0.3125%,Powerplex16HS扩增不平衡发生率为0.3125%。结论在血样DNA的检验过程中,通过应用不同PCR扩增试剂盒进行检测,能够准确获取到不同位置的异常基因,减少基因缺失、扩增不平衡所带来的误差影响,具有较高的推广价值。
 
  PCR扩增试剂盒注意事项:
 
  1.Pfu扩增效率通常比Taq酶差,这是由于Pfu具有3'-5的外切酶活性(高保真性)所引起的,不是由于Pfu酶的质量不稳定所致。Pfu扩增1.5kb以下的DNA片段和Taq没有多大差别。
 
  2.10xPfu PCR Buffer中已含有Mg+,用该缓冲能保证扩增产物的保真性。提高反应体系的pH和Mgt浓度能部分提高DNA扩增的产率,但产物的保真性将有所下降。
 
  3.用Pfu扩增时,引物的纯度要求较高,长度要求大于18bp,Tm在55-80℃之间。引物的浓度在0.1-0.5uM之间,比Taq略高。Pfu具有33-5的外切酶活性可能会降解引物,特别是溶液中没有dNTP的情况下。所以,Pfu必须是最后加入到反应体系中,并立即进行PCR反应。
 
  4.Pfu的热稳定性比Taq酶高,对于GC含量很高的模板,变性温度可以提高到98℃,而不会影响Pfu的活性。
 
  5.PCR产物为平端,不能直接用T/A克隆方式克隆。需要加A后才能进行克隆。
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