猪脑钠素ELISA试剂盒的操作要领

　　猪脑钠素(BNP)是一种由心脏分泌的利钠肽，在心血管疾病的诊断和治疗中具有重要意义，猪脑钠素ELISA试剂盒采用双抗原夹心法测定标本中猪脑钠素/脑钠尿肽(BNP)水平。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中猪脑钠素/脑钠尿肽(BNP)相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成黄色。颜色的深浅和样品中的猪脑钠素/脑钠尿肽(BNP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过校准曲线计算样本中猪脑钠素/脑钠尿肽(BNP)浓度。
 

　　猪脑钠素ELISA试剂盒的操作步骤：
 

　　1.加样：标准品设定5个浓度点，每个浓度设定平行孔，加入50μl不同浓度的标准品；空白孔设定1个孔，加入50μl蒸馏水作为空白对照孔；待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl，使样品稀释度为5倍。
 

　　2.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
 

　　3.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
 

　　4.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
 

　　5.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
 

　　6.温育：操作同2。
 

　　7.洗涤：操作同4。
 

　　8.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。
 

　　9.终止：每孔加终止液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。
 

　　10.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)，测定应在加终止液后15分钟以内进行。