PCR扩增试剂盒是分子生物学领域中的重要工具

　　PCR扩增试剂盒是分子生物学领域的重要工具，其工作原理基于聚合酶链式反应(PCR)技术，核心是模拟DNA在生物体内的自然复制过程，通过体外酶促反应实现特定DNA片段的指数级扩增。其工作流程可分为三个关键步骤，构成一个循环周期：
 

　　1.变性：将待扩增的DNA模板加热至94-98℃，使双链DNA解离成单链。这一步骤通过破坏氢键实现DNA的解旋，为后续引物结合提供单链模板。
 

　　2.退火：温度降至50-65℃，试剂盒中的特异性引物与单链DNA的互补序列结合。引物是短的单链DNA片段，通常长20-30bp，确保仅目标区域被扩增。
 

　　3.延伸：温度升至72℃左右，耐热的Taq DNA聚合酶以dNTPs为原料，沿模板合成新的DNA链。此过程遵循碱基互补配对原则，形成完整的双链DNA。
 

　　通过重复上述循环，目标DNA片段的数量呈指数增长，理论上经过n次循环可扩增至2n倍，从而实现微量DNA的高效检测。
 

　　PCR扩增试剂盒的使用注意事项：
 

　　1.试剂操作
 

　　-加入顺序：注意加入试剂的顺序，以保证所有反应板孔温育的时间一致。
 

　　-防止污染：使用干净的塑料容器配置洗涤液，避免不同批次试剂间的交叉污染。
 

　　-试剂保存：底物A易挥发，应避免长时间打开盖子；底物B对光敏感，需避光保存，且避免用手接触，因其可能有毒。实验完成后应立即读取OD值。
 

　　2.样本要求
 

　　-采集保存：需使用无菌采集管收集疑似感染样本(如肺泡灌洗液、血液或组织)，避免污染。临床样本需在生物安全柜中操作，符合二级生物安全防护要求。短期保存(≤7天)可置于2-8℃；长期保存需-20℃或-80℃，避免反复冻融导致核酸降解。
 

　　-纯度质量：合成的引物必须是ULTRAPAGE或者HPLC级别，其他纯化方式PCR扩增后，会造成扩增条带不全或者模糊。提取的DNA模板必须纯度高(OD260/280>1.80)。
 

　　3.设备校准
 

　　-定期校准移液器、热循环仪等关键设备，确保温度控制准确性和液体转移准确性。