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人椎间盘髓核细胞提取物

  • 更新时间:  2020-07-03
  • 产品型号:  
  • 简单描述
  • 人椎间盘髓核细胞提取物采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
详细介绍

培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080),85%;北美胎牛血清(United States,GIBCO,货号16000-044),15%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。

人椎间盘髓核细胞提取物是从人椎间盘髓核细胞提取的,人椎间盘髓核细胞从正常人椎间盘髓核组织制备。正常人椎间盘髓核组织采集自各地方医院,采集工作根据IRB 和 HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆,表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
总RNA制备:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。公司提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。

cDNA制备:纯化后的总RNA来合成cDNA链,以50ul总反应体系进行逆转录,体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA,1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析,保证了产品的质量。

蛋白制备:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人椎间盘髓核组织裂解液,离心去除组织碎片,通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度,组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF,-80度保存。

潜在的应用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA选择性剪接;<3>基因克隆与目标测序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白检测与蛋白质组学;<6>芯片研究与表达图谱。

 产品名称

英文名称

货号

 人椎间盘髓核细胞提取物

Human Intervertebral Disc: Normal Nucleus Pulposus Cell Derivatives

CS-X3552

 


细胞分类:

一种:
是冻存产品,由氮直液接拿出,干冰运输给客户。一般不推荐这种,也较少使用这种方式,因为复苏手法对于细胞状态影响较大,一旦细胞状态不好,很难说是细胞自身不行,还是复苏没操作好;另外温度对细胞、基因功能状态影响很大,也不是细胞储存的方式,快递时间也很难控制,多种因素影响产品的质量;干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种:
是我们复苏好细胞,QC通过后,T-25灌满培养基常温运输给客户,排除复苏造成影响,常温运输也对细胞影响也不大,只需加25元运费(顺丰)。
质量保证:我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。
细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
以下是公司正在热销的相关产品: 

Qualitative人EJ抗体/抗甘氨酰tRNA合成酶抗体(EJ/GlyRS)ELISA试盒 pUNO1-hLGALS9a

Qualitative人抗双链DNA抗体/天然DNA抗体(dsDNA)ELISA试盒pUNO1-hOLR1a

Qualitative人抗利尿激素/管加压素/精氨加压素(ADH/VP/AVP)ELISA试盒pUNO1-hPPARGa

Qualitative人抗DNA酶B抗体(anti-DNase B)ELISA试盒 pUNO1-hPPARGb

0.094ng/ml人胎儿红蛋白(HBF)ELISA试盒 pUNO1-hSLC15A2a

9.4ng/ml人抗巨细胞病抗体IgM(anti-CMV IgM)ELISA试盒 pUNO1-hSTIM1b

46.9pg/ml

人抗巨细胞病抗体IgG(anti-CMV IgG)ELISA试盒 pUNO1-hTIGIT

9.4pg/ml人抗环胍氨肽抗体(CCP)ELISA试盒pUNO1-hTMED10

0.094ng/ml人抗补体1q抗体(C1q)ELISA试盒 pUNO1-hTMED2a

0.094ng/ml人抗人绒毛膜促性腺激素抗体(AhCGAb)ELISA试盒 pUNO1-hVISTA-D187
人椎间盘髓核细胞提取物清淀粉样P物质(SAP)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)桑色素(标准品)

谷胱甘肽S转移酶μ2(GSTμ2)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)沙苑子苷A(标准品)

谷胱甘肽S转移酶α4(GSTα4)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)苷(标准品)

成肌分化蛋白(MyoD)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)素(标准品)

Smad同源物3(Smad3)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)山栀苷酯(标准品)

膜联蛋白A11(ANXA11)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)商陆皂苷(标准品)

膜联蛋白A1(ANXA1)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)芍药内酯苷(标准品)

过氧化还原酶5(PRDX5)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)蛇床子素(标准品)

氧化低密度脂蛋白(OxLDL)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)蛇床子素

桥粒斑蛋白(DSP)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)麝香(标准品)

管内皮生长因子165(VEGF165)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)升麻醇-3-O-β-D-吡喃木糖苷(标准品)

促卵泡素(FSH)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)升麻素(标准品)

胃动蛋白1(GKN1)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)升麻素苷(标准品)

α2-巨球蛋白(α2M)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)升麻醇-3-O-α-L-拉伯糖苷(标准品)

纤维胶凝蛋白1(FCN1)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)圣草次苷(标准品)

 


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