您好,欢迎进入上海莼试生物技术有限公司网站!
全国服务热线:13585831301
上海莼试生物技术有限公司
您现在的位置:首页 > 技术文章 > 发酵支原体探针法荧光定量PCR检测试剂盒反应五要素

发酵支原体探针法荧光定量PCR检测试剂盒反应五要素

浏览次数:82发布日期:2021-05-25

发酵支原体探针法荧光定量PCR检测试剂盒反应五要素:

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:

①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。

②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。

订购说明:
1、绝大部分产品备有现货,一般情况下都能订货当日发货。
2、部分非常用产品,需提前1-2日预订,海外期货则需要提前3-6周预订。
3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化,若有变动以订货当日价格为准。
4、每日订单截止时间为16点整,部分城市可到17点整,因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。
5、请办理完货款后,将底单等连同收货人的地址、姓名、等以短信、等形式通知我们。

Contact Us
  • 联系QQ:3004972506
  • 联系邮箱:sdfskdfhs3004972506@qq.com
  • 传真:86-021-60443211
  • 联系地址:上海嘉定区澄浏中路3404号

扫一扫  微信咨询

©2021 上海莼试生物技术有限公司 版权所有  备案号:沪ICP备17029297号-3  技术支持:化工仪器网    GoogleSitemap    总访问量:27007 管理登陆