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倍赞氏金蝇探针法荧光定量PCR检测试剂盒使用步骤

浏览次数:33发布日期:2021-05-26

倍赞氏金蝇探针法荧光定量PCR检测试剂盒使用步骤:
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意:DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA,后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线(以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的DN段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管,分别为6,5,4,3,2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL超纯水(用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或超纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL,建议每次稀释10倍,梯度稀释至10E7拷贝/μL)。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头,从6号管中取5 μL溶液到5号管中,充分震荡1分钟,得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头,从5号管中取5 μL溶液到4号管中,重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR(见下步),每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。

磷酸化APS抗体
有丝分裂激酶A抗体
干扰素诱导蛋白AIM2抗体
水通道蛋白-2抗体
肿瘤抑制基因ABI2/精氨酸酪氨酸蛋白激酶结合蛋白抗体
ADP核糖基化因子样11抗体
ARM重复X连锁蛋白ARMCX3抗体
ARM重复X连锁蛋白ARMCX1抗体
ARM重复X连锁蛋白ARMCX2抗体
自噬相关蛋白10抗体
酰基辅酶A结合结构域蛋白6抗体
氨基酰化酶1抗体
脂肪甘油三酯脂酶抗体
磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α1抗体
双调蛋白抗体
磷酸化水通道蛋白2抗体
粘附相关激酶抗体
磷酸化粘附相关激酶抗体
磷酸化蛋白激酶B抗体
磷酸化水通道蛋白2抗体
磷酸化APP淀粉样肽前体蛋白抗体
磷酸化蛋白激酶B抗体
磷酸化APP淀粉样肽前体蛋白抗体

 

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