您好,欢迎进入上海莼试生物技术有限公司网站!
全国服务热线:13585831301
上海莼试生物技术有限公司
您现在的位置:首页 > 技术文章 > PCR扩增试剂盒使用后可扩增出多条DNA片段

PCR扩增试剂盒使用后可扩增出多条DNA片段

浏览次数:35发布日期:2021-08-19
  PCR扩增试剂盒是从克隆有ThermuaquaticusDNAPolymerase基因的大肠杆菌经诱导表达后,再经三次过柱纯化分离出来的一个约94KD的重组蛋白。无外源核酸酶和细菌DNA污染,稳定性好,特异性强,适用于各种PCR扩增。本试剂盒已经包括了PCR扩增使用的各种试剂,便于客户配套使用。使用本制品扩增得到的PCR产物的3'端附有一个A碱基,因此可直接克隆于T-Vector中。
  所谓多重PCR(MultiplexPolymeraseChainReaction,mPCR),也称复合PCR,由Chambehian'在1988年提出(Chambehian'et.al.NucleicAcidsRes.1988Dec9;16(23):11141–11156.),基本原理与常规PCR相同,区别在于多重PCR的反应体系是加入多对引物,各对引物分别结合在模板的相应位置,扩增出多条DNA片段。
  PCR扩增试剂盒实验注意事项:
  1.进行PCR反应前,可以将所有gDNA的浓度稀释到同一浓度,并转移到PCR8联管中,一方面是便于排枪操作,另一方面是加入相同起始量的gDNA,这样可以降低文库的浓度差异,便于混合文库。
  2.大多数情况下引物是1管,操作相当方便;当目标区域是外显子或者是其他连续区域时,我们会把引物分装为2管,分别命名PrimerpoolT1与PrimerpoolT2,这时需要第二轮PCR前把产物合并,再进行下一步反应。
  3.执行多重PCR反应时,特别是样本量多的情况下,可以将T1设为一组,T2设为一组,便于制备反应试剂混合液和排枪操作;并把解冻好的试剂放置在冰盒上,在冰盒上进行加样操作。
  4.在实验中,可以在PCR管壁上和管盖上同时进行反应编号标记,防止高温或其他原因导致记号消失,避免后续产物混合操作失误,造成样本交叉污染。
  5.第二轮PCR后,因为YFBufferB试剂比较粘稠,在清洗纯化的时候不能吸走所有试剂,可以剩余5-10μl,否则会把磁珠一起吸走,造成样品的损失,导致产物回收率下降。
Contact Us
  • 联系QQ:3004972506
  • 联系邮箱:sdfskdfhs3004972506@qq.com
  • 传真:86-021-60443211
  • 联系地址:上海嘉定区澄浏中路3404号

扫一扫  微信咨询

©2021 上海莼试生物技术有限公司 版权所有  备案号:沪ICP备17029297号-3  技术支持:化工仪器网    GoogleSitemap    总访问量:26665 管理登陆