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创伤弧菌探针法荧光定量PCR检测试剂盒

  • 更新时间:  2020-07-29
  • 产品型号:  50T
  • 简单描述
  • 创伤弧菌探针法荧光定量PCR检测试剂盒所谓实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
详细介绍

注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。

产品名称

创伤弧菌探针法荧光定量PCR检测试剂盒

英文名称

Vibrio vulnificus

货号

CP934875

储存条件:

14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

探针法:

创伤弧菌探针法荧光定量PCR检测试剂盒aqMan 探针是一种寡核苷酸探针,它的荧光与目的序列的扩增相关。它与目标序列上游引物和下游引物之间的序列配对。荧光基团连接在探针的5’ 末端,而淬灭剂则在3’ 末端。当完整的探针与目标序列配对时,荧光基团发射的荧光因与3’ 端的淬灭剂接近而被淬灭。但在进行延伸反应时,聚合酶的5’ 外切酶活性将探针进行酶切,使得荧光基团与淬灭剂分离。随着扩增循环数的增加,释放出来的荧光基团不断积累。因此荧光强度与扩增产物的数量呈正比关系。相对于染料法,Taqman探针法具有更高的特异性和准确性。
使用方法:
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意:DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA,后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线(以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的DN段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管,分别为6,5,4,3,2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL超纯水(用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或超纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL,建议每次稀释10倍,梯度稀释至10E7拷贝/μL)。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头,从6号管中取5 μL溶液到5号管中,充分震荡1分钟,得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头,从5号管中取5 μL溶液到4号管中,重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR(见下步),每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
探针荧光定量PCR试剂盒原理分析如下图:

应用案例:
样品 DNA 的制备
1.用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼 容。。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒 DNAout。 本试剂盒免费赠送 15 次 DNA 病毒裂解液试用装(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀释阳性对照(以 10E2-10E7 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的长为 86bp 的 DN段作为阳性对照。
2.标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
3.用带芯枪头分别加入 45 μL 模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
4.在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡 1 分钟,得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。5.换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
6.换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7.换枪头,在 4 号管中加 5 μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照到 4 号管中,得1×10E4 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用
8.重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。设置 qPCR 反应(20  μL 体系,在样品制备室进行)
9.在 PCR 管中加入下列成分。
以下是公司正在热销的产品:

NHEDC2  线粒体钠/交换蛋白质2抗体半固体营养琼脂

NHE1/APNH1  钠通道蛋白抗体GN 增菌液

NGX6  鼻咽癌细胞相关基因6抗体SS 琼脂

NGN3/Neurogenin 3  神经元素3抗体SS 琼脂平板

NGN1/Neurogenin 1  神经元素1抗体克双糖铁琼脂(KI)

NGF-β  神经生长因子β抗体克双糖铁琼脂(KI)斜面(限供汽运)

NGFR/p75NTR  神经生长因子受体抗体培养基

NGB/neuroglobin  脑红蛋白/神经红蛋白/神经球蛋白抗体尿素琼脂基础(pH7.2)

NGALR/Slc22A17  可溶性载质转运蛋白22A17抗体40%尿素溶液

NGAL/Lipocalin 2  脂质运载蛋白抗体尿素琼脂斜面(pH7.2)

NG2/CSPG4  黑色素瘤硫酸软骨素蛋白多糖4抗体尿素琼脂斜面(pH7.2)

NG2  硫酸软骨素蛋白多糖4/黑色素瘤相关蛋白抗体苯氨酸培养基

NF-κB p105/p50(Phospho-Ser373)  酸化细胞核因子p50/k基因结合核因子抗体苯氨酸培养基

创伤弧菌探针法荧光定量PCR检测试剂盒NFX1  核转录因子X盒结合蛋白1抗体苯氨酸培养基

NF-M/Neurofilament M  中分子量神经丝蛋白抗体10%三化铁猪细小病PCR检测试盒白头翁皂苷D

猪细小病实时荧光PCR检测试盒白鲜

猪圆病PCR检测试盒白杨素

猪圆病1型和2型双重实时荧光PCR检测试盒白杨素-7-葡萄糖酸苷

猪圆病1型实时荧光PCR检测试盒白芷属脑

猪圆病2型实时荧光PCR检测试盒百两金素A

猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪轮状病三重实时荧光RT-PCR检测试盒百秋李醇

猪流行性腹泻病RT-PCR检测试盒百蕊草素I

猪流行性腹泻病实时荧光RT-PCR检测试盒半边旗4F

猪传染性胃肠炎病实时荧光RT-PCR检测试盒半边旗5F
荧光定量PCR检测试剂盒


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