荧光定量PCR检测试剂盒

荧光定量PCR检测试剂盒需要自备的器材：
1．仪器：分析天平、离心机、荧光 PCR 扩增仪、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器（2 µL、20µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：荧光 PCR 反应管、眼科剪、眼科镊、生理盐水、1.5 mL 经焦碳酸二乙酯（DEPC）水
处理的灭菌离心管、吸头（10 µL、200 µL、1000 µL）、灭菌双蒸水。
具有下列特点：
1.产品仅用于科研即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板，操作简单，定量准确快速。
2. 引物经过优化，特异性强。预期的 PCR 产物长度为 560 bp。
3. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
4. 提供阳性对照，便于分析试验结果。

产品特征:

荧光定量PCR检测试剂盒灵敏度高：能对低拷贝或多样性模板进行定量。
特异性强：采用热启动酶的激活机制，抑制非特异性扩增 。
重复性好：扩增曲线重合度高，受干扰影响少。
扩增效率高：扩增曲线Ct值低，起峰快，效率高。
原理:
所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
荧光定量PCR检测试剂盒检测方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加*同步。
定量PCR扩增荧光曲线图
PCR产物熔解曲线图
2.TaqMan探针法：
探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，产品仅用于科研使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成*同步。

荧光定量PCR实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其*溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
以下是荧光定量PCR检测试剂盒的相关产品：

IL-6  白介素6抗体化矢车菊素：花青素

IL-6  白介素6抗体5-羟色胺酸5-HTP

IL-6  白介素6抗体亥茅酚苷

IL-6  白介素6抗体异鼠李素-3-O-新橙皮苷

IL-6  白介素6紫蓳灵; 紫堇醇灵

IL-6  白介素6高丽槐素; 马卡因

IL5RA/CD125  白介素-5受体α链抗体IL-5Rα秦皮苷; 白蜡树苷

IL-5  白细胞介素5抗体奇任醇，奇壬醇

IL-4R/CD124  白细胞介素4受体抗体IL-4Rα高良姜素

IL-4I1  白细胞介素4诱导蛋白1抗体比枯枯灵；毕灵；荷包牡丹

IL-4 (human)  白介素4抗体(人)异槲皮苷

IL-4  白介素4抗体酰紫堇灵; 酰紫堇醇灵

IL-3R alpha/CD123  白介素3受体a链抗体三叶豆紫檀苷

IL-33/NFHEV  白介素33抗体苷

IL-33  白介素33抗体去二异香酚RT EasyTM II(With gDNase)闹羊花素ＩＩ

RT EasyTM II(With gDNase)                    闹羊花素III

链cDNA合成预混体系Master Premix闹羊花素V

RT EasyTM I(Premix)                         尼泊金异酯

RT EasyTM I(Premix)                             尼泊金异酯

链cDNA合成预混体系Master Premix(For qPCR)尼莫地平

RT EasyTM II(Premix) 尼索地平

RT EasyTM II(Premix)尼替西农

RT EasyTM II(Premix)拟人参皂苷F11

PCR HeroTM(With Dye)拟人参皂苷Rh2

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