人肾足突细胞

细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备  记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。
5.研究的范围比较广泛应用的学科领域较为宽广，如细胞学、免疫学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等； 适用的对象范围广，从低等动物到高等动物，一种动物的不同年龄阶段以及不同组织，都可进行有针对性的研究。
6.研究的费用相对较经济可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。

       产品描述：公司提供的原代细胞均来自新鲜组织，公司提供的人源原代细胞均来自新鲜组织，用于培养该细胞的组织采集是根据标准方案进行。细胞的培养采用公司PrimaCellTM原代细胞培养试剂盒来优化目的细胞生长条件，以降低杂细胞的污染，同时保证质量的稳定。在公司技术部标准的操作流程下，原代细胞可以保持分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。

      发货：客户可根据自身科研项目的需要选择不同类型的细胞培养瓶和相应的细胞密度。公司提供的细胞有标准的鉴定流程，保证细胞的纯度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。发货的新鲜细胞还包含:1、发货的T25方瓶中装满50ml左右*培养基；2、说明书及注意事项；3、公司售后服务标准。

      保存和应用：客户可以根据自己的需求选择新鲜或者冻存的原代细胞，如是新鲜原代细胞，客户收到细胞后应立即将其放入CO2细胞培养箱内静置后2-3h，再进行后续的实验操作。如是冻存细胞，客户收到细胞后应立即将其放入液氮、-80℃冰箱或立即进行复苏。该细胞只可用于科研，不得用于临床应用。

培养步骤:
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。
​以下是公司正在热销的相关产品： 

0.188ng/ml大鼠C型钠尿肽(CNP)ELISA试盒AAA

0.938ng/ml大鼠Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)ELISA试盒 Dnp-Pro-TNF-α (71-82)amide (human)

46.875pg/ml大鼠Ⅰ型前胶原C末端肽(CⅠCP)ELISA试盒Antho-RWamide I

18.75pg/ml大鼠Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(ⅠCTP)ELISA试盒 Antho-RPamide II

1.875ng/ml大鼠骨胶原交联(Cr)ELISA试盒Antho-RPamide I

18.75pg/ml大鼠Ⅰ型胶原N末端肽(NTX)ELISA试盒Antho-Rnamide

0.188ng/ml大鼠C反应蛋白(CRP)ELISA试盒Antho-Rfamide

0.188ng/ml大鼠C肽(C-Peptide)ELISA试盒Anthopleurin-A

9.375pg/ml大鼠皮质醇(Cortisol)ELISA试盒Cys(NPys)-Antennapedia Homeobox (43-58) amide

0.234ng/ml大鼠促肾上皮质激素释放激素(CRH)ELISA试盒Biotinyl-5-aminopentanoyl- Antennapedia Homeobox (43-58) ami
人肾足突细胞阿黑皮素原(POMC)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)奥卡西平烯醇-

脑肽酶(NEP)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)奥卡西平-D4(主要的)

利钠肽受体1(NPR1)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)沙美特罗-d3

利钠肽受体2(NPR2)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)头孢吡肟

利钠肽受体3(NPR3)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)二盐头孢吡肟

叶受体1(FOLR1)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)洛索洛芬

跨膜丝氨蛋白酶6(TMPRSS6)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)盐延胡索素

神经肽Y受体Y5(NPY5R)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)L-延胡索素

活化T-细胞核因子2(NFATC2)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)尼可地尔-d4

TERF1相互作用核因子2(TINF2)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)尼可地尔N-氧化物

溶质载体家族30成员10(SLC30A10)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)6-羟基尼可地尔

内β-N-酰基氨基葡萄糖苷酶(ENGASE)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)25-脱酰基利福平

孕免疫调节结合因子1(PIBF1)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)N-去基利福平

醛氧化酶1(AOX1)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)去基波生坦

管紧张素1-7(Ang1-7)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)羟基去基波生坦

细胞分类：

一种：
是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。

胞生长条件，以降低杂细胞的污染，同时保证质量的稳定。在公司技术部标准的操作流程下，原代细胞可以保持分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。

      发货：客户可根据自身科研项目的需要选择不同类型的细胞培养瓶和相应的细胞密度。公司提供的细胞有标准的鉴定流程，保证细胞的纯度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。发货的新鲜细胞还包含:1、发货的T25方瓶中装满50ml左右*培养基；2、说明书及注意事项；3、公司售后服务标准。

      保存和应用：客户可以根据自己的需求选择新鲜或者冻存的原代细胞，如是新鲜原代细胞，客户收到细胞后应立即将其放入CO2细胞培养箱内静置后2-3h，再进行后续的实验操作。如是冻存细胞，客户收到细胞后应立即将其放入液氮、-89℃冰箱或立即进行复苏。该细胞只可用于科研，不得用于临床应用。

细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM，常温条件下离心5分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，吹打均匀后，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO摇匀后进行冻存。冻存培养基
冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有 DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的*冻存培养基。
1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型*冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优化，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 
2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。
操作流程：
1.1主要试剂与仪器：倒置相差显微镜（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存：
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液（37℃预热，8～10倍体积）离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内，在37℃、5％co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek－293细胞48h换液1次，细胞长至60%～70%融合时，用0.25%胰酶消化1～2min，将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散，为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次，获得细胞悬液，然后加入倍量的培养基，温和混匀，吸管分装混合液，传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞，待细胞变圆、脱壁并浮起，加入少量培养基离心，再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液，用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数，按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液＝(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞，以0.25％胰酶消化成单细胞悬液，计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中，每两小时随机取出3瓶细胞，吸除培养基及未贴壁细胞，加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞，取其平均值，按照公式：贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100％，计算贴壁率。 
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液，以1×104/孔接种于24孔板，每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔，计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d，绘制细胞生长曲线。

实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
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0.094ng/ml大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)ELISA试盒Procathepsin B (26-50) (rat)

0.188ng/ml大鼠过氧化物酶体增殖因子活化受体γ( PPAR-γ)ELISA试盒Procathepsin B (36-50)(rat)

0.094ng/ml大鼠胃蛋白酶(PP)ELISA试盒Procollagen Type I (212-216)

0.375ng/ml大鼠戊糖素(Pentosidine)ELISA试盒SAMS Peptide

9.375pg/ml大鼠状旁腺激素(PTH) ELISA试盒 Syntide 2, Calmodulin-Dependent Protein Kinase Substrate

0.094ng/ml大鼠状旁腺激素相关蛋白(PTHrP) ELISA试盒 YSFVHHGFFNFRVSWREMLA

18.75pg/ml大鼠P53(P53)ELISA试盒VRKRTLRRL

56.25pg/ml大鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA试盒VEGFR-KDR/Flk-1Antagonist Peptide, K237

37.5pg/ml大鼠氧化低密度脂蛋白抗体(OLAb)ELISA试盒pTH-Related Protein (1-16) (human, mouse, rat)

0.094ng/ml大鼠卵巢癌标志物CA125ELISA试盒pTH-Related Protein (1-34) (human, mouse, rat)
人肺动脉成纤维细胞糖磺基转移酶15(CHST15)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)(R)-诺普利钠盐

糖磺基转移酶5(CHST5)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)诺普利(8R,S)-二(非对映构体混合物)

糖磺基转移酶6(CHST6)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)诺普利环己基类似物

糖磺基转移酶7(CHST7)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)洛匹那韦-d8

糖磺基转移酶8(CHST8)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)洛匹那韦代谢产物M-1

糖磺基转移酶10(CHST10)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)洛匹那韦代谢产物M-3/M-4

糖磺基转移酶11(CHST11)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)褪黑素-d4

糖磺基转移酶12(CHST12)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)盐美法

糖磺基转移酶13(CHST13)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)7-单一去基米诺环素

Cochlin蛋白(COCH)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)9-单一去基米诺环素

中心体BRCA2相互作用蛋白(CNTROB)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)7-二去基米诺环素二盐

末端脱氧核糖核转移酶(DNTT)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)9-二去基米诺环素

角化蛋白(CNFN)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)咪唑立宾盐盐

Claspin蛋白(CLSPN)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)硝苯地平-d6

Calmin蛋白(CLMN)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)脱硝苯地平

冷冻保存细胞之方法:
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。